摘要:
目的通过卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏与眼部多次激发的方法建立过敏性结膜炎小鼠模型。设计实验研究。研究对象 SPF级、6~8周龄BALB/c小鼠20只。方法将20只小鼠随机分为正常对照组(PBS组)和过敏性结膜炎组(OVA组),每组10只。OVA组于第0、2、4、6、8天,分别在小鼠腹腔注射200 μl闪卵清蛋白致敏液。于第10、11、12、13、14天,分别在小鼠双眼点眼卵清蛋白激发液10 μl。PBS组同上操作,将腹腔注射液和滴眼液替换为PBS。于过敏激发液点眼15~30分钟裂隙灯下观察眼表状态,取材后吉姆萨染色评估炎性细胞浸润程度及免疫组化染色检测炎性因子表达情况。通过裂隙灯评估过敏性结膜炎症状,包括眼睑水肿、结膜水肿,结膜充血和溢泪四项,同时观察小鼠的10分钟挠眼次数;第15天将小鼠处死,分离小鼠脾脏,称重,计算脾脏指数;运用免疫组化检测白介素(IL)-8、IL-6、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的表达,同时用吉姆萨染色,评估炎性细胞的浸润情况。主要指标过敏性结膜炎症状评分、挠眼次数、脾脏指数、IL-8、IL-6、TSLP的表达水平和炎性细胞的浸润情况。结果 OVA组小鼠存活率为100%。与PBS组相比,OVA组小鼠表现出明显的脾脏肿大,眼睑水肿,充血和溢泪。第10、11、12、13、14天时 OVA 组的症状评分均高于 PBS 组,分别为 3.1±1.45、6.6±1.71、5.7±1.34、6.4±1.51、10.1±1.66和1.3±0.95、1.9±0.99、1.7±0.82、1.3±1.06、1.4±0.84(P均(0.05);OVA 组小鼠挠眼次数均多于 PBS 组,分别为 28.8±5.88、29.3±7.42、27.2±8.2、28.0±6.82、26.2±5.09和 12.3±4.32、12.7±5.03、13.3±5.62、12.7±5.54、16.4±2.67(P均(0.05)。15天时,OVA组高于小鼠的脾脏指数高于PBS组,分别为6.67±0.66 和 4.21±0.40(t=10.02,P=0.0001)。PBS 组小鼠 TSLP 的平均光密度值低于 OVA 组,分别为 10.23±1.52 和 20.25±1.75(t=7.482,P=0.0017),IL-6 的平均光密度值分别为 13.15±1.68 和 24.93±3.02 (t=5.911,P=0.0041),IL-8 的平均光密度值分别为12.23±3.22和22.12±4.00(t=3.337,P=0.0289)。OVA组的结膜组织中观察到明显嗜酸性粒细胞浸润,计数为(1366.67±57.74)/mm2,PBS组小鼠为(266.67±57.74)/mm2(t=23.33,P=0.0001)。结论采用卵清蛋白腹腔注射致敏与眼部多次激发的方法成功建立过敏性结膜炎小鼠模型,可为人类过敏性结膜炎机制研究及药物研发提供简便可靠的实验工具。(眼科,2021,30:189-194)