摘要：
目的:探讨银杏总黄酮(TFG)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的髓核细胞凋亡的影响,及对核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的调控作用.方法:将人椎间盘髓核细胞分为正常组、IL-1β诱导组、二甲基亚砜(DMSO)组、TFG不同浓度组(5、10、20、40、80、160mg/mL),除正常组外,各组均用浓度为10ng/mL的IL-1β 诱导培养24h后,CCK-8法检测细胞增殖活性.将髓核细胞分为正常对照组、IL-1β 诱导组、TFG低(20mg/mL)、高(80mg/mL)剂量组、Nrf2通路抑制剂组(Brusatol组,0.2μg/mL)、TFG+Brusatol组(80mg/mL+0.2μg/mL);用CCK-8法检测细胞活性;ho-chest 33258染色检测细胞凋亡情况;免疫荧光染色法检测活性氧(ROS)含量;免疫荧光共聚焦法检测Nrf2入核情况;蛋白免疫印迹法检测各组细胞Nrf2、ARE、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平.结果:与正常组比较,IL-1β诱导组细胞增殖活性降低(P<0.05);与IL-1β诱导组比较,随着TFG浓度升高,细胞增殖活性逐渐升高,在80～160mg/mL时保持在稳定水平,后续选用20mg/mL、80mg/mL为TFG低、高剂量组进行后续试验.与正常对照组比较,IL-1β诱导组细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率、ROS含量、Nrf2入核数目、Nrf2、ARE、cleaved caspase-3、HO-1、TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.05).与IL-1β 诱导组比较,TFG低、高剂量组细胞增殖活性、Nrf2入核数目、Nrf2、ARE、HO-1蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、ROS含量、cleaved caspase-3、TNF-α 蛋白表达水平降低(P<0.05);且TFG高剂量组细胞增殖活性、Nrf2入核数目、Nrf2、ARE、HO-1蛋白表达水平高于TFG低剂量组(P<0.05),细胞凋亡率、ROS含量、cleaved caspase-3、TNF-α蛋白表达水平低于TFG低剂量组(P<0.05);Brusatol组细胞增殖活性、Nrf2入核数目、Nrf2、ARE、HO-1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、ROS含量、cleaved caspase-3、TNF-α 蛋白表达水平升高(P<0.05).与TFG高剂量组比较,TFG+Brusatol组细胞增殖活性、Nrf2入核数目、Nrf2、ARE、HO-1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、ROS含量、cleaved caspase-3、TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.05).结论:TFG可通过激活Nrf2/ARE通路,发挥抗炎、抗氧化、抗髓核细胞凋亡作用.
