高级检索
当前位置: 首页 > 详情页

靶向bcor基因的crispr/cas9基因编辑系统的建立与基因编辑

Establishment of CRISPR/Cas9 gene editing system targeting BCOR gene and gene editing

| 认领 | 导出 |

文献详情

资源类型:

收录情况: ◇ 统计源期刊

机构: [1]首都医科大学附属北京天坛医院病理科 [2]首都医科大学附属北京同仁医院病理科头颈部分子病理诊断北京市重点实验室 [3]首都医科大学附属北京同仁医院血液科
出处:
ISSN:

关键词: CRISPR/Cas9技术 基因编辑 B细胞淋巴瘤因子6共抑制因子

摘要:
目的构建靶向B细胞淋巴瘤因子6共抑制因子(BCL6 co-repressor,BCOR)基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统,并在HEK293T细胞系中进行BCOR基因编辑,为研究BCOR的功能打下基础。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计两对靶向BCOR基因的单链引导RNA(smallguideRNA,sgRNA),将PX458载体进行BbsⅠ酶切,将sgRNA插入到PX458载体中,转化到宿主菌DH5α大肠埃希菌中。过夜后每个sgRNA-PX458质粒挑取3个阳性克隆,进行PCR和测序验证。挑选序列正确的BCOR sgRNA-PX458质粒,转染HEK 293T细胞,进行BCOR基因编辑,采用荧光显微镜及流式细胞学观察HEK 293T细胞绿色荧光蛋白表达的情况,确定是否成功及转染效率,提取HEK 293T细胞DNA,PCR扩增BCOR基因的相应片段,进一步Sanger测序验证,鉴定BCOR sgRNA-PX458 CRISPR/Cas9系统对BCOR基因的编辑能力和效率。结果经测序验证,成功构建了靶向BCOR sgRNAPX458质粒的CRISPR/Cas9系统,转染HEK293T细胞后,可见HEK293T细胞内有绿色荧光蛋白表达,测序鉴定发现BCOR sgRNA-PX458质粒能够产生插入或者缺失,可以成功编辑BCOR基因。结论成功构建了靶向BCOR的sgRNA-PX458质粒,可在HEK 293T上成功编辑BCOR基因,为进一步研究BCOR的功能奠定了基础。

基金:
语种:
第一作者:
第一作者机构: [1]首都医科大学附属北京天坛医院病理科
通讯作者:
推荐引用方式(GB/T 7714):

资源点击量:21166 今日访问量:0 总访问量:1219 更新日期:2025-01-01 建议使用谷歌、火狐浏览器 常见问题

版权所有©2020 首都医科大学附属北京同仁医院 技术支持:重庆聚合科技有限公司 地址:北京市东城区东交民巷1号(100730)