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神经干细胞与视网膜色素上皮细胞相关基因表达差异的实验研究

Gene expression characteristics in neural stem cells and retinal pigment epithelium in mice

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资源类型:
机构: [1]首都医科大学附属北京同仁医院 北京同仁眼科中心 北京市眼科学与视觉科学重点实验室,100730
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关键词: 神经干细胞 视网膜色素上皮细胞 基因表达 分化

摘要:
目的探讨神经干细胞(NSC)与成熟视网膜色素上皮细胞(RPE)间相关基因的表达差异。方法分离小鼠原代RPE并进行扩增培养。应用反转录-聚合酶链反应鉴定眼区发育相关基因在NSC和RPE的表达,分析相关差异。进一步应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)对共同表达的基因进行定量分析,比较两者差异。测量指标的数据资料以均数±标准差(x珋±s)的形式表示;采用独立样本t检验的方法分别比较NSC和RPE间各基因表达量的差异。结果原代分离后的小鼠RPE细胞呈圆形生长,细胞内充满色素颗粒,一般48 h后,细胞可稳定贴壁生长,部分细胞呈双核或多核,并逐渐呈三角形或多边形状伸展。培养7 d左右,细胞生长接近融合状态,进行RPE细胞的特异蛋白免疫荧光染色,可见细胞角蛋白及S-100等显著表达。在眼区发育相关的主要转录因子中,NSC特异表达Sox2 mRNA,RPE细胞特异表达Chx10、Opn4及RPE65 mRNA,两者均表达nestin、Pax6、R、Mitf、Hes1、Zo-1及tublin mRNA。在NSC和RPE共同表达的相关基因中,Pax6、Mtif、Rx,Hes1及ZO-1在RPE的相对表达量都显著高于其在NSC的表达,差异有统计学意义(t=-16.751,-5.439,-8.109,-4.96,-9.172;P(0.05)。而nestin在两类细胞的表达比较,差异无统计学意义(t=-0.328,P)0.05)。结论在NSC向RPE诱导分化过程中,Chx10、Opn4及RPE65具有一定特异性,可作为RPE的鉴定蛋白。NSC和RPE存在共同表达的基因特性,但表达水平存在较大差异,可以在诱导分化过程中进行调控来促进RPE的定向分化。

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第一作者:
第一作者机构: [1]首都医科大学附属北京同仁医院 北京同仁眼科中心 北京市眼科学与视觉科学重点实验室,100730
通讯作者:
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