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壳聚糖膜与兔角膜内皮细胞生物相容性的研究

Biocompatibility of chitosan carrier with rabbit corneal endothelium

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收录情况: ◇ 北大核心 ◇ CSCD-E ◇ 中华系列

机构: [1]首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心北京市眼科学与视觉科学重点实验室
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关键词: 壳聚糖 角膜 内皮细胞 生物相容性 毒性作用

摘要:
背景目前对角膜内皮移植载体的研究较多,但究竟何种载体更适合作为角膜内皮移植载体并无明确定论。目的观察壳聚糖的细胞相容性及组织相容性,探讨该材料作为角膜内皮移植载体的可能性。方法10只新西兰白兔用过量麻醉法处死后摘取新鲜眼球,用组织块培养法培养角膜内皮细胞(CECs),将壳聚糖膜片置于无菌48孔板中,每孔加入200μl细胞悬液进行孵育,观察细胞的形态和密度。采用扫描和透射电子显微镜观察细胞表面和超微形态结构。用免疫荧光法检测壳聚糖膜片上培养的CECs中纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Coll-Ⅰ)、连接黏附分子-1(ZO-1)的表达。健康新西兰白兔10只,左眼经前房植入壳聚糖膜片,右眼仅做前房穿刺作为对照组,术后裂隙灯显微镜下观察术眼眼前节炎症反应及角膜水肿情况。于术后1、4、8周分别测量术眼角膜厚度,术后2周用角膜内皮镜观察兔眼的CECs形态,测定CECs密度,术后1个月、3个月时摘除兔眼眼球,角膜组织行苏木精-伊红染色,观察角膜炎症反应情况。采用配对t检验对实验组和对照组间各测量指标的数据资料进行统计学分析。结果 CECs在壳聚糖膜片孵育5 d后形成完整的单层多角形细胞,形态规则,7 d后达到90%融合,细胞40%呈六角形,细胞间连接紧密。扫描电子显微镜下可见兔CECs为近圆形或多边形,以桥粒紧密连接,细胞表面有微绒毛;透射电子显微镜下可见细胞膜表面的突起、伪足和微绒毛,细胞质内可见空泡和其上有核糖核蛋白体的扩张内质网,染色质丰富。免疫荧光检测显示,壳聚糖膜片上培养的CECs中FN、Coll-Ⅰ、ZO-1呈阳性表达。兔活体前房内植入含CECs的壳聚糖膜片后3 d,裂隙灯显微镜下可见前房内渗出物和角膜水肿;术后14 d左右,前房内渗出完全吸收,角膜恢复透明。术后1、4、8周,实验组与对照组间角膜厚度的差异均无统计学意义(t=1.377,P=0.265;t=1.795,P=0.165;t=0.390,P=0.760);两组间CECs密度和六角形细胞率的差异均无统计学意义(P=0.365、0.062);术后3个月时实验兔角膜组织病理学检查发现,壳聚糖膜片周围炎性细胞浸润消失,角膜内皮结构良好。结论壳聚糖载体膜片与体外培养的兔CECs生物相容性好,是CECs移植的潜在良好载体。

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第一作者:
第一作者机构: [1]首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心北京市眼科学与视觉科学重点实验室
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