摘要:
目的 建立大鼠耳蜗大上皮嵴(greater epithelial ridge,GER)细胞体外培养体系,探讨其在离体培养条件下的生物学特性、生长模式及超微结构.方法 取生后1 d大鼠耳蜗,利用机械分离和酶消化相结合的方法分离出纯GER细胞,分别于无血清和含10%胎牛血清的DMEM培基中进行培养,观察细胞生长特性,并对培养物进行溴脱氧尿苷(BrdU)、鬼笔环肽(phalloidin)、ZO1、钙视网膜蛋白(calretinin)及肌球蛋白Ⅶa(myosin Ⅶa)免疫组化鉴定及扫描电镜观察.结果 GER体外培养细胞呈现典型的上皮样多角形外观,细胞间连接紧密,具有明显的增殖能力,在含血清培养基中易形成贴壁细胞岛,而在无血清培养条件下则易形成悬浮细胞球.GER细胞呈现BrdU、phalloidin以及ZO1染色的阳性反应,而calretinin及myosinⅦa则表现为阴性.扫描电镜显示GER细胞表面可见微绒毛和中心体,但未见毛细胞特异性结构纤毛束.结论 GER体外培养细胞具有增殖能力,在不同培养条件下可分别呈现贴壁细胞岛及悬浮细胞球生长特性,GER细胞表达上皮细胞来源标记物,但不表达毛细胞特异性标记物.