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嗜酸粒细胞亲合素N端突变体重组腺病毒在小鼠变应性鼻炎中的作用

Effects of recombinant eotaxin N terminal mutant (Met/Eotaxin) adenovirus on allergic rhinitis in mice

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收录情况: ◇ 中华系列

机构: [1]重庆医科大学生物医学工程系耳鼻咽喉头颈外科研究室,400016 [2]100730,首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科 [3]重庆第三军医大学烧伤研究所
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ISSN:

关键词: 趋化因子 突变体 鼻炎 变应性

摘要:
目的获取人嗜酸粒细胞亲合素(Eotaxin)N端突变体(Met/Eotaxin)重组腺病毒,探讨其在小鼠变应性鼻炎中的作用.方法从人外周血单个核细胞总RNA中克隆人400 bp的Eotaxin基因;通过N端点突变获取Met/Eotaxin基因,构建pAdtrack-CMV-Met/Eotaxin腺病毒穿梭质粒;将该质粒在大肠杆菌BJ5183中与腺病毒基因组质粒进行同源重组;将Met/Eotaxin重组腺病毒载体在AD293细胞中包装、扩增获取Met/Eotaxin重组腺病毒(Ad-Met/Eotaxin);采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)和蛋白印迹杂交(Western blot)对Met/Eotaxin重组腺病毒的正确性进行鉴定.采用卵清蛋白(ovalbumin, OVA)致敏和激发诱导小鼠变应性鼻炎,40只小鼠随机分为变应性鼻炎组和Ad-Met/Eotaxin组.Ad-Met/Eotaxin组在每次激发前30 min予以每只小鼠2 ml滴度为5×109 pfu/ml的Ad-Met/Eotaxin腹腔注射.比较二组动物变应性鼻炎症状和鼻黏膜形态学改变,并在荧光显微镜下观察腺病毒转染效率标志物--绿色荧光蛋白在鼻黏膜等组织中的表达.结果PCR和Western blot结果显示Ad-Met/Eotaxin构建正确;Ad-Met/Eotaxin腹腔注射后可高效转染小鼠鼻黏膜;Ad-Met/Eotaxin可显著减轻小鼠变应性鼻炎症状以及鼻黏膜形态学改变.结论 Ad-Met/Eotaxin具有阻断小鼠变应性鼻炎的作用.

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第一作者:
第一作者机构: [1]重庆医科大学生物医学工程系耳鼻咽喉头颈外科研究室,400016
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