摘要:
目的研究与特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病相关的反应性T细胞克隆的T细胞受体β链可变区(TCRBV)基因特征.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增25例ITP患者和20名正常人外周血以及20例脐带血的TCRBV 24个家族的基因序列,在长泳道测序胶上电泳,形成TCRBV互补决定区3(CDR3)基因表达谱型图.通过谱型图上电泳条带分析TCRBV基因分布特征,切割代表性条带测序.结合临床特点进行分析.结果 (1)急性ITP(aITP)和慢性ITP(cITP)的TCRBV CDR3基因表达谱型图有明显不同,15例aITP浓集条带与正常对照组相比,差异无统计学意义(P=0.179).10例cITP则都出现以一些浓集条带为代表的寡克隆T细胞增生,浓集条带明显多于正常对照组(P<0.05).其中6例cITP在TCRBV8亚家族分别出现1~2条浓集条带,共8条浓集条带,3例cITP在TCRBV 13.1亚家族各出现1条浓集条带,4例cITP在TCRBV 14亚家族出现5条浓集条带,3例cITP在TCRBV 17亚家族出现4条浓集条带.将这20个浓集条带直接测序,有19个条带测序为单克隆T细胞扩增,1条BV14条带测序呈多克隆性.(2)比较10例cITP患者T细胞克隆的TCRBV基因或者编码CDR3的氨基酸,其中2例患者的TCRBV8全部基因序列相同,另有3例患者的TCRBV 13.1全部基因序列相同.4例cITP患者中有2例的T细胞克隆TCRBV17的CDR3完全一致,全部序列仅仅框架区4有3个氨基酸不同,另有2例的T细胞克隆的TCR BV 17的CDR3序列仅有4个氨基酸不同,表明不同cITP患者有同样或者功能类似的TCRBV基因编码的T细胞克隆增殖.不同患者分属不同TCRBV基因家族的19个T细胞克隆的CDR3区共用3种模体,有7个T细胞克隆的TCRBV CDR3 共用模体 E(D)TQYFGPG;4个T细胞克隆的TCRBV CDR3共用模体 N(K)EQFFGPG;4个TCRBV17的T细胞克隆中有3个T细胞克隆的 TCRBV17 CDR3共用模体 GANVLTFGAG.结论 cITP发病与特定的T细胞寡克隆扩增有关,这些T细胞克隆的 CDR3共享3种可能结合同样抗原的模体.aITP没有明显的T细胞克隆变化.