目的应用分子生物学技术检测角膜上皮中激活正常T细胞表达和分泌的调节物(RANTES)和酸性富含胱氨酸分泌型蛋白(SPARC)基因表达,以期为角膜移植排斥反应的早期诊断提供实验依据.方法随机选择行穿透性角膜移植(PK)手术患者30例(30眼).其中男21例21眼,女9例9眼;年龄6～78岁,平均53.2岁;分3组,并以行准分子激光屈光性角膜手术(PRK)患者的正常角膜上皮作为对照.应用环钻取组Ⅰ和Ⅱ角膜上皮.应用RNA提取、RT-PCR、Northern印迹杂交、组织病理、激光密度扫描半定量等技术,对比观察排斥、非排斥离体角膜片上皮及正常、PK术后在体角膜上皮中RANTES和SPARC基因的表达.与此同时应用裂隙灯、共聚焦显微镜(CMTF)检查患者角膜有无排斥反应的体征.结果正常角膜SPARC呈现低表达,未见RANTES表达.SPARC在3组表达率分别为100%、90%、100%,3组比较无显著性差异(P>0.05).RANTES在组Ⅰ的离体片上皮中呈高表达 80%;在组Ⅱ10例患者中均未见表达;在组Ⅲ角膜上皮样本中,有60%呈现高表达.这说明RANTES 的表达与排斥的发生呈正相关.在对组Ⅲ患者进行裂隙灯、CMTF检查的同时进行RANTES基因检测,阳性率分别为30%、50%、60%,3组比较有一定的差异性(P<0.05),RANTES表达与临床诊断有较高的相关性、一致性和时相性.基因检测的阳性率高于临床检查,二者相互印证.结论对于角膜移植排斥反应,RANTES基因表达敏感性及阳性率高于临床检查方法,提示可以作为监测角膜排斥反应可靠的实验指标,其临床重要意义,有待今后验证.