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ciz1基因通过调控mek-erk1-2信号通路影响视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的实验研究

Effect of CIZ1 gene on the proliferation and apoptosis of Y79 cells through MEK-ERK1-2 signaling pathway

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收录情况: ◇ 统计源期刊

机构: [1]首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心北京市眼科研究所北京市眼视光与视觉科学重点实验室
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关键词: 视网膜母细胞瘤 CIZ1 增殖 凋亡 MEK-ERK1-2信号通路

摘要:
目的探讨锌指蛋白(CIZ)1基因影响视网膜母细胞瘤(RB)细胞增殖和凋亡的机制。方法 RB组织芯片购自西安艾丽娜生物科技有限公司,人神经母细胞瘤细胞系Y79购自美国ATCC公司。应用免疫组化方法检测CIZ1基因在RB肿瘤组织和正常视网膜组织中的表达情况;应用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和Western blot方法检测CIZ1基因在RB细胞中信使核糖核酸(mRNA)和蛋白的表达水平。选取RB细胞系Y79细胞,采用数字表法随机分为对照组、干扰CIZ1基因组(shCIZ1)-1及shCIZ1-2等3组。采用不同的慢病毒分别感染阴性对照组和两组shCIZ1基因组细胞。应用荧光定量PCR及Western blot方法检测敲低效率;应用细胞增殖测量试剂盒(CCK8)方法检测细胞的生长、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3-7的活性和细胞凋亡相关蛋白表达的情况;通过Western blot方法检测丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)1-2信号通路相关蛋白的表达变化。CIZ1的基因表达量、蛋白表达水平、RB细胞的增殖倍数、Caspase3-7、MEK、p-MEK、ERK及p-ERK蛋白的表达水平,采用单样本K-S拟合优度法进行正态性检验,符合正态分布者以均数±标准差进行描述。多组样本间不同组间均数的比较采用重复测量资料的方差分析,采用LSD检验进行两两比较。结果与正常视网膜组织相比,CIZ1基因在RB肿瘤组织中的表达水平显著上调;在RB细胞中,CIZ1基因mRNA水平及蛋白水平均显著高于正常人视网膜色素上皮细胞(ARPE),Y79细胞、人神经母细胞瘤细胞系(WERI-Rb)-1细胞中mRNA相对表达量分别为(0.061±0.001)、(0.041±0.001),与ARPE19细胞中mRNA相对表达量(0.025±0.001)相比,差异均具有统计学意义(t=41.58,18.68;P(0.05);慢病毒干扰CIZ1基因的表达可以显著降低CIZ1的mRNA与蛋白表达水平,shCIZ1-1组和shCIZ1-2 CIZ1组mRNA的相对表达量分别为(0.015±0.008)和(0.008±0.003),与对照组mRNA的相对表达量(0.032±0.003)相比,差异均具有统计学意义(t=3.72,5.357;P(0.05);敲低CIZ1基因可以显著抑制RB细胞的增殖,也可以抑制增殖相关基因即细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白的表达,与对照组相比差异有统计学意义(t=21.18,21.80;P(0.05);同时还可以抑制增殖相关基因Cyclin E1蛋白的表达,与对照组相比差异有统计学意义(t=17.26,16.41;P(0.05)。敲低CIZ1可以显著增强细胞凋亡相关蛋白Caspase3-7的活性,上调Caspase-3和Caspase-7蛋白的表达。Western blot检测敲低CIZ1基因对MEK-ERK1-2信号通路影响的结果显示,CIZ1下调可以显著抑制磷酸化的MEK的表达水平,与对照组相比差异具有统计学意义(t=3.925,8.461;P(0.05);CIZ1下调可抑制ERK1-2蛋白的磷酸化水平,与对照组相比差异具有统计学意义(t=14.12,28.36;P(0.05)。结论敲低CIZ1基因可以通过抑制MEK-ERK1-2信号通路抑制RB的生长。

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第一作者:
第一作者机构: [1]首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心北京市眼科研究所北京市眼视光与视觉科学重点实验室
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