摘要:
目的使用Transwell小室将大鼠关节软骨细胞(ACC)和CD105阳性滑膜间充质干细胞(CD105+SMSC)进行间接共培养,研究共培养体系下CD105+SMSC成软骨分化的能力和伴随的炎症反应情况。方法在体外分离培养大鼠SMSC,通过形态学观察和成骨、成脂、成软骨三系分化鉴定。使用磁珠分选方法(MACS)筛选出表面标记为CD105阳性的细胞,并用免疫荧光和流式细胞学方法鉴定。体外分离培养大鼠ACC,用形态学观察及甲苯胺蓝染色鉴定。ACC按一定比例(4∶1,2∶1,1∶1,1∶2,1∶4)与CD105+SMSC在Transwell小室中间接共培养,另设单独培养的CD105+SMSC作阴性对照,CD105+SMSC+成软骨诱导培养液(chondrogenic culture medium,CCM)作阳性对照。在培养的第14天提取各组CD105+SMSC总RNA,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测二型胶原(Col2A1),蛋白聚糖(aggrecan)、性别决定区Y框蛋白9(SOX-9)、转化生长因子-β3(TGF-β3)等相应的成软骨指标表达,检测聚蛋白多糖酶-5(ADAMTS-5)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、Runt相关转录因子-2(RUNX-2)等炎症指标的表达。结果分离培养后的SMSC可进行成骨、成脂、成软骨三系分化。MACS分选后可见免疫荧光和流式细胞学鉴定均提示CD105阳性。与软骨细胞间接共培养14 d后,Real-time PCR检测结果示,与阴性对照组相比,2∶1和1∶1实验组的各成软骨指标较阴性对照组上升,ADAMTS-5和RUNX-2炎症指标无明显改变,MMP-3和MMP-13指标显著下降。结论与ACC间接共培养可以促进CD105+SMSC向成软骨方向分化,并能够在一定程度上降低其分化过程中的炎症反应。