目的通过构建HK2-GFP-LC3稳定细胞系,研究20℃深低温暴露诱导的自噬体数量特征,为明确自噬低温暴露响应和自噬相关药物高通量筛选提供依据。方法构建稳定表达GFP-LC3融合蛋白的HK2-GFP-LC3细胞系,建立HK2-GFP-LC3细胞体外20℃低温暴露自噬分析模型,用荧光显微镜进行自噬体计数,进行低温暴露和自噬体数量相关性分析,建立自噬体数量和低温暴露时长的数学回归模型。结果 HK2-GFP-LC3细胞GFP-LC3融合蛋白阳性表达率达到100%,指示自噬体的绿色明亮荧光斑点（GFP-LC3 spots）数量在20℃暴露后随时间逐渐增加,GFP-LC3 spots阳性细胞率和低温暴露时长（h）呈直线正相关,拟合公式为Y=1.649×X+17.41（解释为暴露时间每增加1h,细胞GFP-LC3 spots阳性率增加1.649%）。复温后GFP-LC3 spots数量逐渐下降。GFP-LC3 spots数量在复温前后表现为倒U形曲线发展变化过程。结论体外低温暴露能够时间依赖性激活细胞自噬,复温可能能够抑制自噬。