摘要：
目的 探讨分泌白细胞介素(interleukin,IL)-10的B细胞诱导CD4+T细胞向调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)转化的机制.方法 免疫磁珠法分离C57BL/6J小鼠脾脏B细胞,CD40L抗体刺激B细胞48 h,培养43 h时,向培养液中加入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)+佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)+离子霉素+莫能霉素,逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测IL-10 mRNA表达水平.免疫磁珠法分离C57BL/6J小鼠脾脏CD4+T细胞,根据培养条件不同,将细胞分成四组,对照(Control)组;共培养(Co-culture)组;非接触培养(Transwell)组;IL-10拮抗(Anti-IL-10)组.培养72 h后,流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+的百分比,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养上清液中IL-10蛋白水平.结果 与未刺激的B细胞相比,B细胞经刺激后IL-10 mRNA水平显著增加,差异具有统计学意义(t=3.130,P<0.05);流式结果显示,Co-culture组CD4+CD25+Foxp3+的百分比较Control组、Transwell组显著增加,差异具有统计学意义(q值分别为2.338,5.650,P值均<0.05),Transwell组CD4+CD25+Foxp3+的百分比明显高于Anti-IL-10组(q=15.091,P<0.05);Co-culture组细胞培养上清液中IL-10的蛋白水平明显高于其他三组,差异具有统计学意义(q值分别为10.870,5.193,10.170,P值均<0.05).此外,Anti-IL-10组培养上清液中IL-10的蛋白水平与Transwell组比较差异具有统计学意义(q=4.978,P<0.05).结论 B细胞通过分泌IL-10诱导CD4+T细胞向Tregs细胞转化,并且细胞间接触起到协同效应.
