资源类型：
申请人：
北京市眼科研究所
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首都医科大学附属北京同仁医院
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当前专利权人：
北京市眼科研究所
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首都医科大学附属北京同仁医院
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申请号：
申请日期：
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摘要：
本发明公开了一种体外培养类玻璃体的方法，包括如下步骤：将多能干细胞扩增培养至细胞汇合度40%～90%，采用干细胞消化液消化干细胞；第0天，弃掉干细胞消化液，加入拟胚体培养基，形成细胞悬液；向所述细胞悬液中加入ROCK通路抑制剂，在细胞消化液中培养1～10天，得到拟胚体小球；将所述拟胚体培养基换成类玻璃体培养基，培养14～60天，得到泡状玻璃体。本发明的方法分化而来的类玻璃体样本含有与体内玻璃体类似的蛋白成分，与现阶段的人工玻璃体相比具有了生物学特性，是更接近人体眼球玻璃体的物质。可大量应用于手术中的玻璃体填充，及玻璃体相关疾病的疾病模拟及玻璃体移植。
主权项：
1.一种体外培养类玻璃体的方法，包括如下步骤： 将多能干细胞扩增培养至细胞汇合度40%～90%，采用干细胞消化液消化干细胞； 第0天，弃掉干细胞消化液，加入拟胚体培养基，形成细胞悬液； 向所述细胞悬液中加入Y-27632，在细胞消化液中培养1～10天，得到拟胚体小球； 将所述拟胚体培养基换成类玻璃体培养基，再将所述拟胚体小球分化培养28～60天，得到所述类玻璃体； 所述类玻璃体培养基由如下浓度的成分组成：体积百分比69% DMEM 培养基、体积百分比23% F12 培养基、体积百分比1% B27添加剂、体积百分比4% 胎牛血清、0.1mM 非必需氨基酸、2 mM谷氨酰胺、0.1 mM 2-甲氧雌二醇、100μM 牛磺酸、0.5μM 视黄酸、体积百分比1% 磷脂酰丝氨酸和100ng/μL富半胱氨酸61； 所述分化培养的第18天，加入20 ng/μL ~ 200 ng/μL 富半胱氨酸蛋白61； 所述类玻璃具有如下特性： （1）所述类玻璃体为泡状结构； （2）所述类玻璃体内部有明显的网状结构，具有微管蛋白、胶原蛋白IV和层粘连蛋白； （3）所述类玻璃体含有CLSTN1、胶原蛋白II、Fibrillin和GAPDH； （4）所述类玻璃体的外壁由单层或多层细胞组成，所述细胞由视网膜色素上皮细胞、角膜内皮细胞和视网膜穆勒细胞组成。
