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◇ 统计源期刊
◇ CSCD-E
文章类型：
机构：
[1]首都医科大学附属北京同仁医院咽喉科耳鼻咽喉头颈科学教育部重点实验室(首都医科大学)
临床科室
耳鼻咽喉-头颈外科
首都医科大学附属北京同仁医院
首都医科大学附属同仁医院
咽喉科
出处：
ISSN：
关键词：
人乳头状瘤病毒6
人乳头状瘤病毒11
癌基因
慢病毒表达载体
稳定转染
喉上皮细胞系
摘要：
目的 分别构建过表达人乳头状瘤病毒（human papillomavirus,HPV）6型和11型的E6、E7癌基因的慢病毒载体，建立HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因过表达的SNU-1076喉上皮细胞系模型。方法 分别合成表达HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因的片段，构建重组慢病毒载体pHBLV-CMV-h-HPV6-E6-E7-3FLAG-ZsGreen-Puro和pHBLV-CMV-h-HPV11-E6-E7-3FLAG-ZsGreen-Puro。包装慢病毒后转染进入人喉上皮细胞系SNU-1076，经嘌呤霉素抗性筛选得到阳性克隆。采用实时定量PCR法分别检测HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因过表达的水平。结果通过测序验证质粒构建的成功。实时荧光定量PCR的结果显示，转染HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因的SNU-1076细胞系相较于转染对照空载体的细胞系出现了明显的扩增曲线。其中HPV6-E6-E7的过表达效果为41 692倍，HPV11-E6-E7的过表达效果为124 957倍。结论 利用慢病毒法成功分别建立了过表达HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7的喉上皮SNU-1076细胞系。
基金：
北京市医院管理局儿科学科协同发展中心儿科专项创新推广项目（XTCX201823）；
第一作者：
第一作者机构：
[1]首都医科大学附属北京同仁医院咽喉科耳鼻咽喉头颈科学教育部重点实验室(首都医科大学)
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
肖洋,周思含,牛子捷,等.人乳头状瘤病毒e6和e7蛋白过表达慢病毒载体构建及稳定转染喉上皮细胞系的建立[J].中国耳鼻咽喉头颈外科.2022,29(12):790-794.
