摘要：
目的:探讨微小 RNA-200a(miR-200a)对老年糖尿病大鼠心肌的保护作用及机制.方法:采用高脂饮食+链脲菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病心肌病模型,分为对照组和STZ组.通过注射携带miR-200a腺相关病毒 9(AAV9)在心肌内过表达miR-200a,分为对照+AAV9-control组、对照+AAV9-miR-200a组、STZ+AAV9-control组、STZ+AAV9-miR-200a组,每组 8只.体外培养大鼠心肌细胞 H9c2,分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖培养 24 h)、高糖+AAV9-control+si RNA组(转染 AAV9-control 和 si RNA 48 h后用 33 mmol/L葡萄糖培养 24 h)、高糖+AAV9-control+si核因子 E2 相关因子 2(Nrf2)组(转染 AAV9-control 和 si Nrf2 48 h后使用 33 mmol/L葡萄糖培养 24 h)、高糖+AAV9-miR-200a+siRNA组(转染AAV9-miR-200a和si RNA 48 h后用33 mmol/L葡萄糖培养24 h)、高糖+AAV9-miR-200a+si Nrf 2组(转染 AAV9-miR-200a和 si Nrf2 48 h后用 33 mmol/L葡萄糖培养 24 h).使用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测 miR-200a表达水平,蛋白免疫印迹法检测相关蛋白表达水平;2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测细胞活性氧(ROS)水平;免疫荧光检测 Nrf2表达.结果:与对照组比较,STZ组心肌组织 miR-200a表达下调(P<0.05).与对照+AAV9-control组比较,STZ+AAV9-control组心肌组织 LDH、CK-MB、MDA水平升高,SOD水平、血红素氧化酶 1(HO-1)、细胞核 Nrf2蛋白、细胞质 Nrf2蛋白表达及 Nrf2荧光密度降低(P<0.05).与 STZ+AAV9-control组比较,STZ+AAV9-miR-200a组心肌组织LDH、CK-MB、MDA水平及 TUNEL阳性细胞率降低,SOD水平、HO-1、细胞核 Nrf2蛋白、细胞质 Nrf2 蛋白表达及 Nrf2 荧光密度升高(P<0.05).高糖处理可降低 H9c2细胞存活率,提高 ROS、MDA、LDH水平(P<0.05);在此基础上转染 miR-200a后上述指标被抑制;同时转染miR-200a和si Nrf2后,ROS、MDA、LDH升高,细胞存活率降低(P<0.05).结论:miR-200a提高Nrf2表达从而减轻高糖诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡,这一效应与 Nrf2核易位的促进及下游抗氧化应激信号有关.
