目的:探讨p16、Rb联合检测在头颈部非口咽部鳞状细胞癌（non-oropharyngeal squamous cell carcinoma，NOPSCC）中与高危型人乳头状瘤病毒（high-risk human papilloma virus，HR-HPV）感染的相关性。方法:收集2013年11月至2023年12月首都医科大学附属北京同仁医院存档的有完整临床病理资料的68例头颈部NOPSCC标本蜡块（23例位于鼻腔鼻窦，45例位于喉），采用免疫组织化学EnVision两步法检测p16及Rb的表达，同时采用原位杂交法（in situ hybridization，ISH）检测HR-HPV mRNA的表达，分析p16单独检测及p16、Rb联合检测与HR-HPV mRNA表达的一致性、灵敏度及特异度。结果:68例NOPSCC患者，男性53例，女性15例，中位年龄63.5（57.3，66.8）岁，有吸烟史41例，无吸烟史27例；低T分期（T1/T2）33例，高T分期（T3/T4）35例；有淋巴结转移14例，无淋巴结转移54例；有远处转移2例，无远处转移66例。组织学类型：角化性鳞状细胞癌62例，非角化性鳞状细胞癌5例，基底样鳞状细胞癌1例。p16阳性25例（其中Rb阳性16例，阴性9例；HR-HPV mRNA阳性6例，阴性19例），p16阴性43例（其中Rb阳性38例，阴性5例；HR-HPV mRNA均阴性）。p16与HR-HPV mRNA表达一致性较差（ Kappa值=0.285， P=0.001），灵敏度为100.0%，特异度为69.4%；p16+/Rb-联合检测与HR-HPV mRNA表达一致性较好（ Kappa值=0.719， P<0.001），灵敏度为100.0%，特异度为95.2%。 结论:在头颈部NOPSCC中，推荐p16和Rb免疫组织化学联合检测作为评估HR-HPV感染的指标，p16+/Rb-可提高检测的特异度。