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淫羊藿苷对间充质干细胞增殖与成骨分化的影响

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收录情况: ◇ 统计源期刊

机构: [1]武汉大学附属同仁医院骨科 [2]湖北省中医院骨伤科
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关键词: 淫羊藿苷 间充质干细胞 微RNA 增殖 成骨分化

摘要:
目的 探究淫羊藿苷(ICA)对间充质干细胞(MSCs)增殖及成骨分化的影响。方法 采用不同浓度ICA(0、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6mol/L)干预MSCs,CCK-8检测细胞增殖情况;RT-qPCR及Western blot法检测Run相关转录因子2(Runx2)、骨形态发生蛋白(BMP-2)及Osterix的表达;同时,茜素红对矿化结节进行染色;通过以上实验确定ICA最佳作用浓度;为分析ICA是否通过外泌体发挥作用,将MSCs分为三组(空白组、ICA+GW4869组及ICA组),再次检测MSCs增殖及成骨分化情况;对MSCs外泌体进行高通量测序、京都基因和基因组数据库(KEGG)及基因本体(GO)富集分析;合成miR-122-5p mimic及inhibitor,将MSCs分为三组(空白组、miR-122-5p mimic及miR-122-5p inhibitor组),再次检测MSCs增殖及成骨分化情况,以进一步明确ICA作用机制。结果 CCK-8结果显示,与0 mol/L组比较,1×10-7mol/L组增殖率增加(P<0.05);RT-qPCR、Western blot法及茜素红染色结果显示,与0 mol/L组比较,1×10-7mol/L组矿化结节吸光度、成骨基因m RNA表达量及蛋白表达增高(P(0.05)。与空白组比较,ICA组增殖率、矿化结节吸光度、成骨基因m RNA表达量及蛋白表达增高(P(0.05),ICA+GW4869组则明显降低(P(0.05)。外泌体测序结果显示,共有6种miRNAs表达上调,2种miRNAs表达下调,通过靶基因预测、KEGG及GO富集分析,初步认为ICA通过上调miR-122-5p发挥功能。验证结果显示,与空白组比较,miR-122-5p mimic组增殖率、矿化结节吸光度、成骨基因m RNA表达量及蛋白表达水平增高(P(0.05),miR-122-5p inhibitor组降低(P(0.05)。结论 ICA可调控MSCs外泌体的合成与分泌,上调miR-122-5p的表达进而促进MSCs增殖与成骨分化。

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第一作者机构: [1]武汉大学附属同仁医院骨科
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