资源类型：
申请人：
北京市眼科研究所
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首都医科大学附属北京同仁医院
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当前专利权人：
北京市眼科研究所
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首都医科大学附属北京同仁医院
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申请号：
申请日期：
授权年份：
公开号：
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主分类号：
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摘要：
本发明公开了体外培养玻璃体视网膜类器官的方法，包括如下步骤：（1）将多能干细胞扩增培养至细胞汇合度50%~90%；（2）第0天，将干细胞采用消化液进行消化；加入神经球培养基进行培养；加入基质胶进行培养后，再加入神经球培养基进行培养，得到细胞悬液；（3）向细胞悬液中加入ROCK通路抑制剂，在神经球培养基中培养3~5天，得到外胚层神经球；（4）将神经球培养基换成类玻璃体培养基Ⅰ，同时加入TGFB1蛋白，且放置于摇床震荡培养至25天~28天；（5）将类玻璃体培养基Ⅰ换成类玻璃体培养基Ⅱ，培养至第60天~300天，即得到玻璃体视网膜类器官。本发明体外培养的视网膜的玻璃体类器官能模拟体内玻璃体。
主权项：
1.一种体外培养玻璃体视网膜类器官的方法，包括如下步骤： (1)将多能干细胞扩增培养至细胞汇合度50％～90％； (2)第0天，将所述步骤(1)的细胞汇合度50％～90％的干细胞采用消化液进行消化；加入神经球培养基进行培养，得到细胞悬液Ⅰ；离心细胞悬液Ⅰ，弃掉上清液；加入基质胶后，再加入神经球培养基进行培养，得到细胞悬液Ⅱ； (3)向细胞悬液Ⅱ中加入ROCK通路抑制剂，在神经球培养基中培养3～5天，得到外胚层神经球； (4)将所述步骤(3)的神经球培养基换成类玻璃体培养基Ⅰ，同时加入浓度为15ng/mL～50ng/mL的TGFB1蛋白，且放置于摇床震荡培养至第25天～28天； (5)将所述步骤(4)的类玻璃体培养基Ⅰ换成类玻璃体培养基Ⅱ，培养至第60天～300天，即得到所述玻璃体视网膜类器官； 所述神经球培养基含有如下体积百分比浓度的成分：30％-70％DMEM/F12培养基、30％-70％Neurobasal培养基、0.5mM-4mM L-谷氨酰胺、0.05mM-0.2mMβ-巯基乙醇、0.1％-1％N2添加剂、0.5％-2％B27添加剂、1μM～20μM Rock通路抑制剂； 所述类玻璃体培养基Ⅰ含有如下体积百分比浓度的成分：45％-85％DMEM培养基、15％-55％F12培养基、0.5％-2％非必需氨基酸NEAA、1％-8％胎牛血清、5ng/mL-55ng/mL TGFB1蛋白、0.1％-5％N2添加剂； 所述类玻璃体培养基Ⅱ含有如下体积百分比浓度的成分：45％-85％DMEM培养基、15％-55％F12培养基、2％-10％胎牛血清、0.5％-2％L-谷氨酰胺、10ng/mL-100ng/mL牛磺酸、1％-4％B27添加剂、10ng/mL-200ng/mL TGFB1蛋白、0.1μM-10μM视黄酸。
