摘要：
目的 观察培养的大鼠结膜成纤维细胞中是否表达血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR).方法 实验研究.健康Sprague Dawley大鼠5只,分别施行麻醉处死后,剪取球结膜组织,以组织块法接种并培养成纤维细胞.通过荧光倒置显微镜观察细胞培养情况,以间接免疫荧光法检测波形蛋白、角蛋白表达水平,对所培养的成纤维细胞进行鉴定;设计VEGF164、VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2( Flk-1)3种基因的RNA引物序列,以Trizol法提取成纤维细胞中mRNA,对目的片断进行逆转录PCR扩增及凝胶电泳.扩增产物进行回收及测序,同时采用间接免疫荧光法检测VEGFR-1的表达情况.利用荧光定量PCR法观察培养的成纤维细胞中3种基因的熔解曲线和扩增曲线,同时采用间接免疫荧光法检测VEGFR-1的表达情况.结果 大鼠结膜成纤维细胞中波形蛋白表达阳性,角蛋白表达阴性.逆转录PCR扩增后分别显示VEGF164、Flt-1、Flk-1条带,测序结果符合VEGF164、VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2( Flk-1)基因序列.荧光定量PCR法检测结果显示上述基因均有陡直的扩增曲线,未见杂峰,指数扩增期均在30个循环内.免疫荧光法检测VECFR-1蛋白表达阳性.结论 大鼠结膜成纤维细胞存在VEGF及其受体的基因表达,有VEGFR-1的蛋白表达,抗VEGF类药物可能对大鼠的结膜成纤维细胞产生影响.
