摘要：
目的研究重组腺相关病毒(rAAV)载体介导的绿色荧光蛋白基因(GFP)对体外培养虹膜色素上皮(IPE)细胞的转染和表达,为rAAV携带目的基因治疗视网膜色素变性提供理论依据.方法酶辅助的显微分离方法体外培养IPE细胞并鉴定.按转染倍数(MOI)为103、104、105、106转染已培养3 d的传二代IPE细胞,转染后的第1、3、5、7、9 d,在倒置荧光显微镜下观察IPE中GFP表达阳性的情况,记录100个IPE细胞中GFP阳性所占的百分比.当GFP表达稳定后,共聚焦显微镜照相,流式细胞仪检测rAAV-GFP对IPE的转染效率.结果rAAV-GFP在细胞中的表达呈绿色,弥漫于整个胞浆.MOI=103时,转染后48 h,GFP开始表达,MOI=104、105、106时,转染后24 h时便可看到GFP表达阳性的细胞,细胞的起始表达强度不一,随MOI值的增高而增强,同时GFP的表达强度随着时间延长而逐渐增强,转染后第7～9 d达到高峰并维持,此时检测rAAV-GFP对IPE的转染效率,MOI=103时是26.7%,MOI=104时是53.6%,MOI=105时是60.2%,MOI=106时是63.7%.结论rAAV-GFP对体外培养的IPE细胞转染效率可达60%以上,将腺相关病毒载体介导的基因治疗和IPE移植结合起来治疗视网膜色素变性是可行的.
