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文章类型:
机构:
[1]武汉大学附属同仁医院武汉市第三医院肾内科
出处:
ISSN:
关键词:
微小RNA-22-3p
核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3
人腹膜间皮细胞
腹膜透析
终末期肾脏病
摘要:
目的:探讨微小RNA-22-3p(miR-22-3p)对人腹膜间皮细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达及功能的影响。方法:将NLRP3基因的3′-非翻译区(3′-UTR)序列及其突变体克隆到双萤光素酶报告基因载体psiCHECK2中,构建野生型及突变型重组双萤光素酶报告质粒,与miR-22-3p mimic和miR-22-3p in?hibitor共转染LPS预处理的人腹膜间皮细胞株HMrSV5,检测萤光素酶活性;HMrSV5细胞随机分为以下6组:miR-22-3p NC+LPS组、miR-22-3p NC+LPS+ATP组、miR-22-3p mimic+LPS组、miR-22-3p mimic+LPS+ATP组、miR-22-3p inhibitor+LPS组和miR-22-3p inhibitor+LPS+ATP组。RT-qPCR和Western blot检测NLRP3 mRNA和蛋白的表达,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)的表达和caspase-1的活性,Western blot检测caspase-1 p20蛋白的表达。结果:NLRP3-3′-UTR野生型与miR-22-3p mimic共转染HMrSV5细胞后,萤光素酶活性较对照组降低(P(0.05);NLRP3-3′-UTR野生型与miR-22-3p inhibitor共转染HMrSV5细胞后,萤光素酶活性较对照组升高(P(0.05)。与miR-22-3p NC+LPS组比较,miR-22-3p mimic+LPS组NLRP3的mRNA和蛋白表达、IL-1β和caspase-1 p20的水平均下降且cas?pase-1活性减弱(P(0.05),而miR-22-3p inhibitor+LPS组NLRP3的mRNA和蛋白表达、IL-1β和caspase-1 p20的水平均上升且caspase-1的活性增强(P(0.05)。与miR-22-3p NC+LPS+ATP组比较,miR-22-3p inhibitor+LPS+ATP组NLRP3的mRNA和蛋白表达、IL-1β和caspase-1 p20的水平均上升且caspase-1的活性增强(P(0.05)。结论:miR-22-3p可负性调控人腹膜间皮细胞NLRP3的表达及功能。
基金:
湖北省自然科学基金资助项目(No.2016CFB590);湖北省卫健委科研项目(No.WJ2019Q001);武汉市科技局应用基础前沿项目(No.2019020701011434);武汉市卫计委科研项目(No.WX16B09);
第一作者:
第一作者机构:
[1]武汉大学附属同仁医院武汉市第三医院肾内科
通讯作者:
推荐引用方式(GB/T 7714):
伍军,李相友,封宝红,等.微小rna-22-3p负性调控人腹膜间皮细胞nlrp3的表达及功能[J].中国病理生理杂志.2020,36(11):2068-2073.