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逆转录病毒介导重组CD23 cDNA稳定整合的RVc23-8866细胞株的建立

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机构: 北京医科大学细胞生物室!北京100083,北京医科大学细胞生物室!北京100083,北京医科大学细胞生物室!北京100083,北京医科大学细胞生物室!北京100083,北京医科大学细胞生物室!北京100083,北京医科大学细胞生物室!北京100083
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关键词: 逆转录病毒 B淋巴细胞 CD23 RVc23-8866

摘要:
目的:建立稳定整合的细胞株,为研究外源基因定位整合机制及其对靶细胞生物特征影响,建立一个生物模型。方法:构建重组病毒载体PLXCD;用Lipofectin 将PLXCD 转染PA317 包装细胞,用G418 筛选获得抗性细胞克隆,扩增抗性细胞收集病毒上清;测定病毒上清效价,感染RPMI8866 细胞,用G418 筛选获得抗性细胞(RVc238866 细胞) ;用FACS 分析RVc238866 细胞膜蛋白分子CD23 的表达;用细胞原位杂交(FISH) 分析细胞染色体基因组的改变。结果:建立了稳定整合的RVc238866 细胞株。结论:FISH 结果表明PLXCD 重组体已整合到细胞基因组中;FACS分析表明RVc238866 细胞膜表面CD23 分子的表达量明显降低,并说明了整合入基因组的CD23 片段影响了固有CD23 基因的表达。

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