目的：探讨miR-324-5p对胰腺癌细胞耐药性的影响及其可能的分子机制，为寻找胰腺癌新的治疗靶点提供理论及实验依据。方法：收集化疗前后胰腺癌患者的血浆标本，用不同浓度的吉西他滨处理胰腺癌细胞，qRT-PCR检测吉西他滨处理后胰腺癌细胞及胰腺癌患者血浆miR-324-5p的表达。转染miR-324-5p模拟物或抑制剂，用一定浓度的吉西他滨处理胰腺癌细胞，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot检测凋亡相关蛋白的表达，观察miR-324-5p对细胞凋亡的影响。CCK-8法检测胰腺癌细胞吉西他滨的IC50，Western blot检测耐药相关蛋白的表达，观察miR-324-5p对细胞耐药的影响。转染KLF3过表达质粒，Western blot检测JAK2/STAT3信号通路的表达，进一步探讨miR-324-5p参与细胞耐药的分子机制。结果：miR-324-5p在吉西他滨处理的胰腺癌细胞及接受化疗的胰腺癌患者血浆中高表达。miR-324-5p可抑制吉西他滨处理后胰腺癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达。miR-324-5p可增强胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药性及耐药相关蛋白的表达。过表达KLF3不仅可以部分逆转miR-324-5p对细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响，也可部分逆转miR-324-5p对细胞耐药及耐药相关蛋白表达的影响，这可能是通过调控JAK2/STAT3信号通路实现的。结论：miR-324-5p与胰腺癌细胞耐药相关，并可通过调控KLF3激活JAK2/STAT3信号通路影响胰腺癌细胞耐药。