目的:分析北京市23项新生儿耳聋基因筛查的突变频谱，为遗传咨询及临床诊疗提供依据。方法:研究对象为2022年12月-2023年6月在首都医科大学附属北京同仁医院接受23项耳聋基因筛查的新生儿21 006例。23项耳聋基因筛查包括4个基因23个位点：GJB2基因（c.35delG、c.176＿191del16、c.235delC、c.299＿300delAT、c.109G＞A、c.257C＞G、c.512insAACG、c.427C＞T、c.35insG）、SLC26A4基因（c.919-2A＞G、c.2168A＞G、c.1174A＞T、c.1226G＞A、c.1229C＞T、c.1975G＞C、c.2027T＞A、c.589G＞A、c.1707+5G＞A、c.917insG、c.281C＞T）、线粒体12SrRNA基因（m.1555A＞G、m.1494C＞T）和GJB3基因（c.538C＞T）。分析各基因位点的突变率及等位基因突变频率。结果:21 006例中，耳聋基因筛查未通过率11.516%（2 419/21 006）。4个基因中GJB2基因突变率最高，为9.097%（1 911/21 006）,其次分别为SLC26A4基因2.123%（446/21 006）、GJB3基因0.362%（76/21 006）及线粒体12SrRNA基因0.176%（37/21 006）。GJB2基因中，c.109G＞A和c.235delC突变率最高，分别为6.579%（1 382/21 006）和1.795%（377/21 006）。SLC26A4基因中，c.919-2A＞G和c.2168A＞G突变率最高，分别为1.423%（299/21 006）和0.233%（49/21 006）。等位基因突变频率，GJB2基因c.109G＞A最高，为3.359%（1 411/42 012）,其次为GJB2基因c.235delC,0.897%（377/42 012）及SLC26A4基因c.919-2A＞G,0.719%（302/42 012）。结论:北京市23项新生儿耳聋基因筛查提示，GJB2基因c.109G＞A突变率和等位基因突变频率最高，值得临床重视。本研究丰富了23项新生儿耳聋基因筛查突变频谱的流行病学资料，可为临床提供依据。