摘要:
目的 探讨穿心莲内酯(Andro)对叔丁基过氧化氢(TBHP)诱导的髓核细胞(NPCs)稳态的作用及其可能的机制.方法 以大鼠NPCs为研究对象,利用TBHP构建凋亡模型;利用不同浓度的Andro分别处理正常NPCs细胞和模型细胞,24、48和72 h后,细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞毒性和细胞增殖,筛选Andro的最佳作用浓度和时间.将细胞分为对照组、模型组、Andro组、Wnt/β-catenin抑制剂(iCRT3)组、Andro+iCRT3组.CCK8检测细胞增殖,Western印迹检测Wnt1、β-catenin、转化生长因子(TGF)-β和骨形态发生蛋白(BMP)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Ⅱ型胶原蛋白(Col-Ⅱ)、基质金属蛋白酶(MMP)-3、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶(ADAMTS)5和蛋白聚糖(AGC)的表达.结果 高浓度的Andro对细胞具有一定的毒性作用,Andro的最佳作用浓度和时间为18 μmol/L、24 h.与对照组相比,模型组细胞增殖能力及Wnt1、β-catenin、BMP蛋白水平均显著降低(P≤0.01),TGF-β蛋白水平及Col-Ⅱ、MMP-3、ADAMTS5、AGC水平显著升高(P≤0.01);而Andro和iCRT3单独或联合处理均可明显抑制上述效应(P≤0.01),其中Andro+iCRT3组的抑制作用最强(P≤0.05).结论 Andro能够提高TBHP诱导的NPCs细胞的增殖能力,抑制胞外基质代谢紊乱,其机制可能与Andro调控Wnt/β-catenin通路有关,提示其在椎间盘退变的治疗中具有潜在作用.