目的 研究溶瘤腺病毒rAd.Null联合免疫检查点抑制剂阿特珠单抗（atezolizumab）对三阴性乳腺癌（TNBC）的治疗作用。方法 健康雌性Balb/c小鼠第3～4脂肪垫接种EMT-6乳腺癌细胞（第0天，D0），制备EMT-6乳腺癌原位移植瘤小鼠模型。D7将模型小鼠随机分为移植瘤对照组、rAd.Null组、阿特珠单抗组和rAd.Null+阿特珠单抗（联合治疗）组。D7和D10,rAd.Null和联合治疗组瘤内注射rAd.Null 100μL(2.5×1010VPs);D8,D11和D14，阿特珠单抗和联合治疗组ip给予阿特珠单抗10 mg·kg-1。D26将小鼠处死，剥离完整移植瘤组织，测量移植瘤体积和瘤重，计算抑瘤率；HE染色观察移植瘤组织病理变化。D26同时收集外周血和脾，免疫组织化学染色法观察移植瘤组织CD8+T淋巴细胞和活化胱天蛋白酶阳性细胞即凋亡细胞百分比，流式细胞术分析小鼠外周血和脾中CD3+CD8+T淋巴细胞及脾调节性T细胞（Treg）百分比，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测移植瘤组织中Th1类细胞因子γ干扰素（IFN-γ）、Th2类细胞因子白细胞介素10（IL-10）及肿瘤杀伤相关基因颗粒酶B和穿孔蛋白mRNA表达水平。结果 移植瘤D26，与移植瘤对照组相比，rAd.Null和阿特珠单抗单独治疗组移植瘤体积无明显变化，联合治疗组移植瘤体积明显减小（P＜0.05）;3个治疗组移植瘤重量均明显减轻（P＜0.05,P＜0.01），抑瘤率分别为（54.6±10.2）%,（48.4±30.8）%和（71.1±24.2）%，联合治疗组虽与两者单独治疗组比较无统计学差异，但有进一步降低的趋势。HE染色结果表明，3个治疗组移植瘤组织中肿瘤细胞均有程度不等的坏死，联合治疗组更加明显。免疫组织化学染色结果表明，与移植瘤对照组比较，联合治疗组移植瘤组织中CD8+T淋巴细胞和凋亡细胞百分比明显增加（P＜0.05,P＜0.01），且明显高于两者单独治疗组（P＜0.05,P＜0.01）。流式细胞术结果表明，与移植瘤对照组相比，3个治疗组外周血和脾CD3+CD8+T淋巴细胞百分比均无明显变化，但联合治疗组高于阿特珠单抗单独治疗组（P＜0.05）；两者单独治疗组脾Treg细胞百分比无明显变化，联合治疗组明显降低（P＜0.05）且低于两者单独治疗组（P＜0.05）。RT-qPCR结果表明，与移植瘤对照组相比，联合治疗组移植瘤组织中INF-γ、颗粒酶B和穿孔蛋白mRNA表达明显升高（P＜0.01）,IL-10 mRNA表达明显降低（P＜0.01）且明显高于两者单独治疗组（P＜0.01）。结论 rAd.Null与阿特珠单抗联合治疗对TNBC的治疗作用优于两者单独治疗，该作用可能与其增加肿瘤微环境中CD8+T淋巴细胞浸润、促进肿瘤细胞凋亡并激活细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞功能有关。