目的 提高基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定葡萄球菌的能力.方法 收集首都医科大学附属北京同仁医院2017年9月至2018年6月分离自临床标本(血液、尿液、脑脊液、胸腔积液、腹腔积液等)的葡萄球菌中临床鉴定分值低于2.0的菌株110株,选用Bruker microflex仪器和biotyper软件重新进行直接点靶法和提取法鉴定,以16S rRNA基因、延长因子(tuf)基因测序为"金标准".对仍低于2.0的菌株,生成主要谱峰图(MSP),并与数据库同种菌株的MSP进行树状图分析,计算相对进化距离.结果 经重新直接点靶法鉴定,78.18％(86/110)的菌株鉴定分值达到2.0;经提取法鉴定,94.55％(104/110)的菌株鉴定分值达2.0,通过卡方检验分析,提取法优于直接点靶法(χ2=12.505,P(0.001),但仍有5.45％(6/110)鉴定分值低于2.0,测序结果(质谱鉴定结果)分别为:巴氏葡萄球菌(巴氏葡萄球菌1.803)、缓慢葡萄球菌(缓慢葡萄球菌1.885)、孔氏葡萄球菌(孔氏葡萄球菌1.876)、模仿葡萄球菌(模仿葡萄球菌1.979)、佩滕科夫葡萄球菌(佩滕科夫葡萄球菌1.845)、鸡葡萄球菌(无鉴定结果).结论 对于葡萄球菌,鉴定分值为1.7～2.0,且显示为同种,可报告至种水平.直接点靶法标准化可提高葡萄球菌鉴定可信度.若提取法未能鉴定到种,需自建库,或通过增加菌株优化数据库.