目的建立测定人泪液中阿奇霉素浓度的LC-MS/MS方法。方法用甲醇-水（8∶2,v/v）为萃取溶剂;以罗红霉素为内标,色谱柱为Grace Alltima HP C18（2. 1 mm×50 mm,5μm）,流动相为甲醇水溶液（1∶9,v/v,含0. 1%甲酸）-甲醇乙腈溶液（1∶1,v/v,含0. 1%甲酸）,梯度洗脱方式,柱温为室温,流速为0. 4mL·min-1;用电喷雾离子源,正离子模式,多反应监测扫描方式测定样品中的待测物浓度。用人工泪液作为空白基质,并采集人体泪液进行专属性验证,同时考察该定量方法的标准曲线与定量下限、精密度、准确度、提取回收率、稳定性、基质效应及稀释效应等。结果泪液样品中阿奇霉素浓度的定量范围为5～5000 ng·mL-1（r=0. 999 8）,定量下限为5 ng·mL-1;批内及批间精密度（RSD）均小于10%,准确度（RE）均在±10%,平均提取回收率为（106. 74±5. 40）%;处理后样品4℃放置51 h、未处理样品室温放置7 h、经过3次反复冻融及-20℃保存38 d,样本稳定性均良好;基质效应及稀释效应考察均符合要求。结论本方法快速、灵敏、准确、专属性好、稳定性佳,可用于定量测定人泪液中的阿奇霉素浓度。