目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）快速筛查耐万古霉素屎肠球菌（vancomycin resistant enterococcus faecium,VRE）。方法收集2009至2012年临床分离的150株屎肠球菌为研究对象。其中实验组为60株万古霉素耐药屎肠球菌,对照组为90株万古霉素敏感屎肠球菌（vancomycin susceptible enterococcusfaecium,VSE）。通过PCR方法对所有菌株进行万古霉素耐药基因检测。应用MALDITOF MS检测2组菌株,随机选取实验组30株VRE和对照组30株VSE的质谱峰,应用ClinPro Tools软件统计分析两组之间差异质谱峰的受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线。用筛选的差异质谱峰来鉴别余下的实验组30株VRE及对照组60株VSE。结果 MALDI-TOF MS鉴定所有菌株均为屎肠球菌,60株VRE均携带vanA基因,90株VSE不携带任何万古霉素耐药基因,两组菌株之间存在2个差异蛋白质谱峰,相对分子质量分别为3 516.14和3 644.12,其曲线下面积（area under curve,AUC）分别为0.782、0.767。同时采用这2个质谱峰时,MALDI-TOF MS检测VRE的敏感度为80%,特异度为90%,假阳性率为10%,假阴性率为10%,阳性预测值为80%,阴性预测值为90%。结论 MALDI-TOF MS能够在药敏结果报告前,菌株鉴定同时快速筛查VRE,据此建立新型报告流程即时指导临床合理使用抗生素。