目的建立检测人血清中万古霉素浓度的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法,并与化学发光微粒子免疫法（CMIA）比较方法学性能。方法血清样品经过甲醇沉淀蛋白质,采用安捷伦Poroshell 120EC C18色谱柱（2.1 mm×50 mm,2.7μm）梯度洗脱分离,流动相为甲醇（0.1%甲酸）-水（0.1%甲酸）,流速为0.5 m L/min,内标采用去甲万古霉素,质谱采用ESI正离子多反应监测扫描模式。用该方法定量检测112例临床服用万古霉素患者血清万古霉素含量,并与临床常用的CMIA所得结果进行比较。结果万古霉素在1100μg/m L内线性关系良好（r2=0.996 4）;方法日内日间精密度、准确度均满足药物定量检测要求,且无基质效应和残留效应。Wilcoxon符号秩和检验结果显示,LC-MS/MS测定结果与CMIA结果比较,差异有统计学意义（P(0.05）;相关性检验结果显示,两者线性相关性良好,Y=1.06X-0.37（r=0.986）。结论 LC-MS/MS法性能较好,价格优廉,与CMIA法有较好的相关性,且检测在准确度、精密度上优势明显,可用于临床检测万古霉素的血清药物浓度。