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功能未知基因c16orf68在不同肝细胞系内的表达特征

Expression of function-unknown gene C16orf68 in different hepatic cell lines

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收录情况: ◇ 统计源期刊

机构: [1]首都医科大学附属北京地坛医院 [2]首都医科大学附属北京同仁医院 [3]北京大学医学部研究生院
出处:
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关键词: 肝细胞 C16orf68 多克隆抗体 乙型肝炎病毒

摘要:
目的获取人基因C16orf68,构建原核表达载体,诱导重组蛋白的表达,制备兔抗C16orf68蛋白多克隆抗体,观察C16orf68在各细胞系的表达特征。方法用RT-PCR技术,从肝星状细胞系LX2的总RNA中获得编码C16orf68基因功能片段的cDNA,构建原核表达质粒pET-32a(+)-C16orf68,并导入大肠埃希菌BL21中,IPTG诱导表达重组的重组蛋白。利用Western blot技术、生物质谱技术对表达的C16orf68进行确认。利用纯化的C16orf68重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗C16orf68蛋白的多克隆抗体,利用Western blot和酶联免疫吸附法对多克隆抗体进行特异性分析及效价检测。利用Western blot技术观察C16orf68在多个细胞系的表达特征。结果扩增获得C16orf68基因片段,测序结果与GenBank已公开的基因序列相一致,成功表达了C16orf68重组蛋白,经Western blot鉴定、生物质谱Q-TOF分析均显示表达正确。利用纯化后的重组蛋白,制备了兔抗人C16orf68多克隆抗体,酶联免疫吸附法检测证实多克隆抗体效价)1:320 000,Western blot检测证明多克隆抗体的特异性良好,Western blot结果显示各细胞系该蛋白主要表达于肝实质细胞。结论 C16orf68在肝脏主要表达于肝实质细胞,可能与肝细胞损伤相关。

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第一作者机构: [1]首都医科大学附属北京地坛医院
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资源点击量:21281 今日访问量:0 总访问量:1220 更新日期:2025-01-01 建议使用谷歌、火狐浏览器 常见问题

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