摘要:
目的为胚胎大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元耳蜗植入建立优化的体外分离培养方法。方法①比较3种组合酶消化法对胚胎大鼠DRG神经细胞的分散度以及神经细胞存活时间的差异。实验组:木瓜蛋白酶、胶原酶II/胰蛋白酶、DNA酶I;对照组I:木瓜蛋白酶、胶原酶II/中性蛋白酶II、DNA酶I;对照组II:胶原酶II、胰蛋白酶。②通过激光共聚焦显微镜观察体外培养神经元神经烯醇化酶(neuronal speci?c enolase,NSE)、高分子量神经微丝(neuro?lament H,NF-H)的表达,比较不同酶消化法对神经元轴突长度的影响。结果 DRG神经细胞分散度分别为:实验组80%~90%,对照组I 60%~70%,对照组II 30%~40%;神经细胞存活时间:实验组(12.0±3.0)d,对照组I(7.5±1.5)d,对照组II(4.5±0.5)d。3种组合酶处理的神经元均有NSE和NF-H阳性表达,实验组轴突长度在培养第3、5、7天均明显长于另外两组,差异有统计学意义(F分别为32.612、6.093、9.334,P均(0.05),神经元轴突长度测量:实验组)对照组I)对照组II。结论木瓜蛋白酶、胶原酶II/胰蛋白酶、DNA酶I组合消化法对胚胎大鼠DRG神经细胞体外分离最为理想,可为基因修饰神经元耳蜗植入的实验提供大量的、存活时间长且活性好的细胞来源。