摘要：
为构建诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,并对其干涉效果进行鉴定,设计合成了3条针对DcR3基因的shRNA干扰序列,构建于慢病毒载体质粒中,转化大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性克隆进行菌落PCR鉴定,对PCR鉴定阳性的克隆进行测序分析,将目的质粒感染293T细胞实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)测定包装的病毒滴度,转染HepG2细胞RT-qPCR筛选干扰效果最佳的载体.PCR结果显示,扩增的目的基因DcR3已成功插入pLKD-CMV-G&PR-U6-shRNA载体,阳性克隆测序结果显示与目的基因序列一致,目的质粒转染48 h后,80％以上293T细胞表达绿色荧光,RT-qPCR法测定包装的病毒滴度为分别为6.58×108,4.60×108,4.63×108 IU/mL,其中慢病毒载体3干扰效果最好,达到61.44％.
