摘要：
目的 探讨微小RNA(miR)-1246靶向糖原合成酶激酶3β(GSK3β)对前列腺癌(PCa)细胞迁移、侵袭和增殖的作用及分子机制.方法 采用miRNA-Seq技术检测PCa组织及癌旁组织中差异表达的miRNA;采用实时荧光定量聚合酶连反应(qRT-PCR)技术检测PCa患者癌组织和血清中miR-1246的表达水平;采用生物信息学分析、荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR、蛋白质印迹法分析miR-1246对GSK3β的靶向调控关系.人PCa细胞DU145和LNCaP分别转染miR-1246类似物(mimics)/阴性对照(NC mimics)或 miR-1246 抑制剂(inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞的增殖能力,通过划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞的迁移侵袭能力.两组间比较采用独立样本t检验.结果 miRNA-Seq结果显示,与癌旁组织比较,PCa组织中有15个miRNA表达显著升高,51个miRNA表达显著降低,其中miR-1246在PCa患者组织及血清中表达显著升高(组织:7.93±2.39比1.00±0.16,t=10.070,P＜0.01;血清:15.23±2.77 比 1.01±0.09,t=17.770,P＜0.01).生物信息分析结果显示,miR-1246 与 GSK3β 有互补的核苷酸序列,miR-1246 mimics+WT-GSK3β组细胞荧光素酶活性显著低于NC mimics+WT-GSK3β 组(0.58±0.09 比 1.00±0.14,t=8.128,P＜0.01).蛋白质免疫印迹结果显示,miR-1246 inhibitor 组 GSK3β 的表达明显高于 NC inhibitor 组(2.43±0.29 比 1.00±0.09,t=10.180,P＜0.01),miR-1246 mimics 组 GSK3β 的表达明显低于 NC mimics 组(0.51±0.07 比 1.01±0.12,t=5.120,P＜0.05).在DU145和LNCaP细胞中,miR-1246 mimics组细胞增殖能力、细胞迁移率和细胞侵袭数显著高于NC mimics组,miR-1246 inhibitor组细胞增殖能力、细胞迁移率和细胞侵袭数显著低于NC inhibitor组.蛋白质免疫印迹实验结果显示,miR-1246 inhibitor组Wnt3a和β-catenin的表达低于 NC inhibitor 组(Wnt3a:0.39±0.05 比 1.00±0.12,t=6.620,P＜0.01;β-catenin:0.54± 0.09 比 0.98±0.10,1=6.032,P＜0.01).结论 miR-1246 通过抑制 GSK3β,激活 Wnt/β-catenin 信号通路,促进PCa细胞的迁移、侵袭和增殖.
