资源类型：
收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型：
机构：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所
华中科技大学同济医学院附属同济医院
[2]武汉市第三医院烧伤研究所
[3]华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤科
华中科技大学同济医学院附属同济医院
出处：
ISSN：
关键词：
miR-192
RB1基因
HepG2细胞
基因表达
摘要：
目的探讨miR-192对人肝癌细胞株HepG2中RB1基因表达的调节作用。方法运用生物信息学方法对miR-192进行靶基因预测并分析其潜在靶基因RB1;将含有miR-192结合位点的RB1mRNA 3′端非编码区（3′UTR）片段和在miR-192结合位点进行突变的RB1 3′UTR突变片段克隆至报告基因载体pMIR-Report luciferase vector,重组质粒分别命名为pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut;将重组质粒、Beta-gal内参质粒和microRNA共转染HepG2细胞,双荧光素酶报告基因系统检测各实验组中细胞荧光素酶的表达;SYBR Green荧光定量PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测miR-192对内源性RB1表达的调节作用。结果生物信息学分析筛选出89个miR-192的潜在靶基因,RB1基因是其中之一;测序验证重组质粒pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut构建成功;过表达miR-192时,共转染pMIR-RB1质粒的细胞相对荧光素酶活性（4.80±0.36）较相应过表达miR-NC组（7.90±0.91）明显降低（P(0.05）,而共转染pMIR-Luc或pMIR-RB1-mut质粒的细胞相对荧光素酶活性[pMIR-Luc:（7.68±1.04）;pMIR-RB1-mut:（7.56±0.99）]较相应过表达miR-NC组[pMIR-Luc:（7.86±0.73）;pMIR-RB1-mut:（7.82±1.05）]无显著差异;上调miR-192水平显著降低HepG2细胞中内源性RB1mRNA[（0.56±0.10）vs（1.05±0.13）]和蛋白（47%vs 100%）的表达。结论 RB1基因是miR-192的一个靶基因,在HepG2细胞中,miR-192通过直接结合RB1mRNA 3′UTR而负性调控RB1基因表达。
基金：
国家自然科学基金资助项目（No.30872237,No.81101824）；
第一作者：
第一作者机构：
[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所
[2]武汉市第三医院烧伤研究所
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
谢琼慧,王梦漪,谢卫国,等.mir-192负性调控人肝癌细胞株hepg2中rb1基因的表达[J].华中科技大学学报(医学版).2011,40(6):656-661.
