目的:利用高效液相色谱法（HPLC）建立大鼠血浆中大麦芽碱（Hordenine）浓度的测定方法。方法:色谱柱为Thermo Hypersil GOLD C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,保护柱为Thermo Hypersil GOLD C18（10 mm×4.6 mm,5μm）,以酪胺（Tyramine）为内标,流动相为甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾（三乙胺调节pH 7.10）（5∶95,V∶V）,流速1.0 mL·min-1,等度洗脱,紫外检测波长226 nm,柱温25℃,进样量20μL,甲醇沉淀蛋白法处理血浆样品,取上清液进样分析检测。结果:大鼠血浆中大麦芽碱在6.25～800μg·mL-1的范围内呈良好的线性关系,回归方程为:Y=0.005 6X+0.016 9（r=0.998 0）,定量下限为6.25μg·mL-1。日内精密度在2.94%～8.15%之间,日间精密度在4.30%～7.23%之间,提取回收率大于80%,血浆样品稳定性符合生物样品方法学验证要求。结论:HPLC方法用途广、操作简便、速度快、重复性高、线性范围广、结果准确,可用于测定大鼠血浆中大麦芽碱的血药浓度。