目的建立并评价分枝杆菌液体培养基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）直接鉴定技术。方法收集2014年6月至2016年5月首都医科大学附属北京同仁医院1 466例呼吸科住院患者痰标本,进行BactecTMMGITTM960分枝杆菌快速液体培养（简称液体培养）,以其中报警并经萋-尼抗酸染色确认为抗酸杆菌的105例（无重复病例）为研究对象,对比本实验室自行设计并改良的"同仁"分枝杆菌液体培养直接鉴定法（培养液经特殊前处理后直接进行MALDI-TOF MS鉴定）及传统鉴定法（培养液转种于L-J固体培养基,得到菌落后再进行MALDI-TOF MS鉴定）,并通过16S rRNA基因及16S23S rRNA基因间隔区测序验证。结果以基因测序鉴定为金标准,液体培养直接鉴定与传统鉴定法结果一致率为100%;二者鉴定至属的准确率均为100%（105/105）,鉴定至种的准确率均为99.05%（104/105）。液体培养后直接鉴定与传统鉴定法MALDI-TOF MS鉴定分值≥2.000分的比例差异无统计学意义（χ2=2.952,P=0.086）。4例分值(1.700分的菌株谱图杂峰较多而有效峰较少。结论本实验室自行设计的"同仁"分枝杆菌液体培养MALDI-TOF MS直接鉴定法鉴定结果准确,缩短了分枝杆菌培养和鉴定的时间,且可保证生物安全,对分枝杆菌感染的快速诊断和及时治疗意义重大,适用于我国各级临床实验室。